Назад
Тромбоциты - самые маленькие и, пожалуй, самые универсальные компоненты человеческой крови.
Помимо своей роли в коагуляции и поддержании целостности сосудов, они участвуют во многих физиологических процессах, начиная от иммунного ответа и заканчивая производством антимикробных пептидов и иммуносупрессивных факторов, таких как TGF-β.
Эти универсальные способности делают тромбоциты интересными для исследователей из различных дисциплин. Однако, наряду с исследованием физиологической роли тромбоцитов, существует необходимость в правильном, стандартизированном и, таким образом, воспроизводимом количественном определении параметров тромбоцитов. Средний объем тромбоцитов (MPV) является широко распространенным прогностическим маркером для нескольких состояний, таких как острый коронарный синдром, хроническая болезнь почек и цирроз печени.
Активация тромбоцитов рассматривается как маркер воспалительных процессов, например, при аутоиммунных заболеваниях, таких как сахарный диабет 1 типа, системная красная волчанка и ревматоидный артрит. Мониторинг функции тромбоцитов актуален для пациентов, получающих антикоагулянты. На измерение параметров тромбоцитов влияет выбор антикоагулянта в пробирке, технология измерения и временная задержка после отбора проб.
В данном обзоре основное внимание уделяется преаналитической вариабельности, возникающей в результате использования различных антикоагулянтов in vitro и технологий анализа при определении параметров тромбоцитов, так как даже спустя примерно 180 лет после обнаружения тромбоцитов до сих пор не существует стандартизированной процедуры.
Широко признано, что антикоагуляция in vitro воздействует на клетки крови (например, тромбоциты) с точки зрения структурных свойств, состояния активации и внутриклеточных взаимодействий. Например, ЭДТА - стандартный антикоагулянт для подсчета тромбоцитов - вызывает изменение формы тромбоцитов в зависимости от времени, с последовательной самопроизвольной активацией тромбоцитов, а в редких случаях ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (ПТП) может привести к ошибочному диагнозу. Поскольку это явление было также описано для цитрата и гепарина, надежной альтернативой для правильной оценки количества тромбоцитов при подозрении на ПТП является MgSO4.
Автоматизированные гематологические анализаторы применяют различные принципы и алгоритмы измерения для обнаружения и дифференциации клеточных популяций. В некоторых исследованиях сообщается, что при измерении антикоагулированной ЭДТА крови импедансные методы показывают более высокие значения MPV, чем метод рассеянного света.
Однако разница между значениями MPV, измеренными различными импедансными методами, может быть еще больше. Поэтому исследования количества MPV и тромбоцитов, выполненные с использованием различных технологий анализа, плохо сопоставимы, даже если применялся один и тот же антикоагулянт in vitro.
При проведении измерений в разное время после отбора проб из разных антикоагулянтных образцов крови результаты могут отличаться еще больше.
Для улучшения сопоставимости исследований по измерению количества MPV и тромбоцитов в стандартизованном дизайне исследования должно быть указано, какой антикоагулянт применялся, время задержки после отбора проб и проводились ли измерения на импедансных, флуоресцентных оптических или оптических анализаторах на основе рассеянного света.
Хотя необходимость стандартизации измерений MPV была выявлена в начале 1980-х гг. последние мета-анализы показали, что большинство исследований MPV как биомаркера не имеют стандартизированного дизайна. Это привело к новой редакционной политике, определяющей минимальные требования к рукописям, в которых MPV рассматривается как прогностический маркер при определённых условиях.
Для измерения активации тромбоцитов при помощи экспрессии маркеров активации (например, CD62p и CD63), необходимо брать пробы крови с антикоагулянтами, которые не вызывают повышенной спонтанной экспрессии маркеров активации тромбоцитов, но оставляют тромбоциты незатронутыми. Поэтому применение гепарина и антикоагулированной ЭДТА крови не подходит для измерения активации тромбоцитов, а рекомендуется применение цитрата, MgSO4 или EDTA-CTAD. При выборе метода измерения образования тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегаций важно помнить, что образование в основном опосредуется связыванием PSGL-CD62p и, таким образом, строго зависит от Ca2+. Тем не менее, предлагаемые протоколы измерения образования тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегаций различаются по выбору антикоагулянта in vitro, маркеров активации, пробоподготовки и оценке данных.
Что касается MPV-исследований, то для облегчения сравнения полученных данных необходима стандартизированная схема исследования, в которой указываются применяемый in vitro антикоагулянт, протокол проточной цитометрии и временная задержка после отбора проб.
Несмотря на сообщения о том, что тромбоцитарный ответ лучше сохраняется в течение 24 ч в антикоагулированной гепарином крови, а богатая тромбоцитами плазма из крови с гирудином крови более чувствительна, чтобы показать действие аспирина, рекомендация (SSC/ISTH) заключается в том, чтобы выполнить измерение тромбоцитарной функции при помощи LTA (Light transmission aggregometry) из цитратной крови. Цитратная кровь также применяется для измерения функции тромбоцитов с помощью импедансной агрегометрии, однако, согласно нескольким исследованиям и рекомендации производителя, тромбоцитарная кровь предпочтительнее.
Для всех исследований параметров тромбоцитов необходимо придерживаться рекомендуемых стандартизаций, соответствующим образом подготовить план исследования и четко изложить его.
Оригинальная статья: https://www.degruyter.com/view...
